Колориметрический метод определения железа в сыворотке крови

Г.Н.Кольцова, В.В.Гладун, И.В.Смирнов.
Гематологический Научный Цент РАМН, Москва, ООО «Агат-Мед», Москва.
(Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии (Санкт-Петербург, 6—8 июня 2000 г.) Материалы научно-практической конференции, СПб, 2000, С. 169.)
 

Количество железа в сыворотке крови является важным биохимическим показателем при диагностике заболеваний. Для его определения в настоящее время наиболее часто используются колориметрические методы без депротеинизации сыворотки, но они не всегда позволяют получать прозрачные растворы для определения оптических плотностей образующихся Fe-лигандных комплексов и полностью извлекать железо из железосвязывающих белков, что приводит к ошибкам в определении железа, особенно в мутных, липемических сыворотках и сыворотках с патологическим содержанием железа.

Нами разработана новая композиция реагентов, позволяющая прямым методом без депротеинизации быстро и легко определять железо сыворотке, в том числе мутной, липемической, с заметным гемолизом, а также цитратной плазме.

Железо освобождается из железосвязывающих белков сыворотки крови и восстанавливается при действии кислого рабочего раствора (рН 1,6—1,7), содержащего восстановитель гидроксиламин и детергенты. Затем, после добавления хромогенного лиганда (феррозина) и буфера, образуется устойчивый окрашенный железо-феррозиновый комплекс, оптическая плотность которого измеряется при 570 нм. Из оптического поглощения комплекса вычитается холостая проба на сыворотку (оптическое поглощение образца до добавления феррозина), полученное значение пропорционально концентрации железа. Для исключения влияния меди, содержащейся в сыворотке, в рабочий раствор включена тиомочевина.

На определение железа не влияют: гемоглобин — до 12 г/л сыворотки, билирубин — до 124 мг/100 мл, ионы меди — до 20 мкмоль/л, цитрат натрия — в концентрациях, используемых для получения образцов плазмы крови. Этот метод реализован в наборе реактивов «ЖЕЛЕЗО АГАТ».

Разработанный метод был сравнен с референтным методом, рекомендованным ICSH. Коэффициент корреляции r2 = 0,98, как для образцов сывороток доноров, так и больных с различными нарушениями метаболизма железа.

Метод линеен до 200 мкмоль/л, отклонение величин количества железа, прибавленного и обнаруженного в пробах, не превышает 5%, коэффициент вариации не более 5%.